このページを印刷する このページを印刷する

だしの元はなに?

シリーズ:ちょっと測ってみました

だしの元はなに?

料理の味の決め手となる「だし」。あなたが食べる料理の「だし」の元が何であるか興味が湧くことはありませんか?
モバイルPCR装置を使って、実際に中華だしスープを調べてみました。

試料

牛中華だし(Y社製)0.1gと純水0.9mLの懸濁液

前処理

ボルテックスにて30秒撹拌、5分間放置(遠心なし)
これを①10倍希釈、②100倍希釈、③1000倍希釈し
中心付近から1μL採取し試料とする

反応組成
μL 備 考 (終濃度)
酵素;KAPA 3G Plant(2.5U/μL) 0.8 2U/reaction
Buffer (×2) 8 x1
F-Primer:ウシ/ブタ/ニワトリ (各100μM)※1 0.06/0.06/0.1 400/400/600nM
R-Primer:ウシ/ブタ/ニワトリ (各100μM)※1 0.13/0.14/0.1 800/900/600nM
Probe:ウシ/ブタ/ニワトリ (各100μM)※1 各0.03 各200nM
MgCl2(25mM) 0.8 1.25mM
試料 1
PCR grade water 4.7

反応試料Total 16μL

プログラム
工程 温度 時間
初回変性 95℃ 15sec
アニーリング・伸長 60℃ 30sec 50cycle
変性 95℃ 4sec

 

結果

ウシの信号のみ増加したので材料は牛であることが分かり、10,000倍希釈しても測定できた。
この時のリアルタイムPCRの増幅曲線を下図に示す。

測定はウシ・ブタ・ニワトリのマルチプレックスで実施

※1 プライマー・プローブ配列
Tm
Cow-Primer F    5′-CCCGATTCTTCGCTTTCCAT-3′ (20mer) 66.8
Cow-Primer R    5’-CTACGTCTGAGGAAATTCCTGTTG-3′ (24mer) 65.4
Cow-probe    5’FAM-CATCATAGCAATTGCCATAGTCCAC-BHQ1-3’ (25mer) 72.9
Pig-Primer F    5′-CTTGCAAATCCTAACAGGCCTG-3′ (22mer) 66.2
Pig-Primer R   5′-CGTTTGCATGTAGATAGCGAATAAC-3′ (25mer) 65.0
Pig-probe     5’ROX-AACAGCTTTCTCATCAGTTACACACAT-BHQ2-3′ (27mer) 70.2
Chicken-Primer F    5′-TCTGGGCTTAACTCTCATACTCACC-3′ (25mer) 65.6
Chicken-Primer R    5′-GGTTACTAGTGGGTTTGCTGGG-3′ (22mer) 65.6
Chicken-probe    5’Cy5-CATTCCTAACACTAGCCCTATTCTCC-3’BHQ3 (26mer) 70.3

(株)日本遺伝子研究所製
Tm値計算は最近接塩基法による。ただしプローブは日本遺伝子研究所様の計算法による。
参考論文:Tanabe et al., A Real-Time Quantitative PCR Detection Method for Pork, Chicken, Beef, Mutton, Horseflesh in Foods.
Biosci. Biotechnol. Biochem., 2007, 71(12), 3131-3135