シリーズ：ちょっと測ってみました
マヨネーズから鶏の遺伝子はでる？
マヨネーズの原料はどんなものを使用しているのでしょうか…？
ニワトリの卵黄や植物油、そして酢を原料にしたドレッシングのようですが、本当にニワトリの卵黄を使用しているのか、ふと疑問に思います。
その疑問を解決するために、ニワトリ遺伝子の含有をモバイルPCR装置で調べてみました。
また、マヨネーズをモバイルPCR装置で検査することが可能なのかどうかも、調べてみました。
試料
マヨネーズ
前処理
マヨネーズ0.03gと純水100mLをボルテックスで2分撹拌
直後中心付近から1μL採取し試料とする
反応組成
| μL | 備 考 (終濃度) | |
| 酵素；KAPA 3G Plant(2.5U/μL) | 0.4 | 1U/reaction |
| Buffer （×2） | 8 | x1 |
| F-Primer:ニワトリ (100μM)※1 | 0.1 | 600nM |
| R-Primer:ニワトリ (100μM)※1 | 0.1 | 600nM |
| Probe:ニワトリ (100μM)※1 | 0.03 | 200nM |
| FITC Probe(1μM) | 3 | 188nM |
| MgCl2(25mM) | 0.8 | 1.25mM |
| 試料 | 1 | |
| PCR grade water | 2.6 |
反応試料Total 16μL
プログラム
| 工程 | 温度 | 時間 | |
| 初回変性 | 95℃ | 15sec | |
| アニーリング・伸長 | 63℃ | 15sec | 50cycle |
| 変性 | 95℃ | 3.5sec |
結果
油分が混在する希釈したマヨネーズからでも鶏の遺伝子が検出できた。
この事から食品中の卵黄量をリアルタイムPCRで測定できると考えられる。
※1 プライマー・プローブ配列
| Tm | |
| Chicken-Primer F 5′-TCTGGGCTTAACTCTCATACTCACC-3′ (25mer) | 65.6 |
| Chicken-Primer R 5′-GGTTACTAGTGGGTTTGCTGGG-3′ (22mer) | 65.6 |
| Chicken-probe 5’Cy5-CATTCCTAACACTAGCCCTATTCTCC-3’BHQ3 (26mer) | 70.3 |
(株)日本遺伝子研究所製
Tm値計算は最近接塩基法による。ただしプローブは日本遺伝子研究所様の計算法による。
参考論文：Tanabe et al., A Real-Time Quantitative PCR Detection Method for Pork, Chicken, Beef, Mutton, Horseflesh in Foods.
Biosci. Biotechnol. Biochem., 2007, 71(12), 3131-3135
