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牛白血病プロウイルスDNA測定

シリーズ:まじめに測ってみました

牛白血病プロウイルスDNA測定

あまり知られてはおりませんが、牛白血病のうち牛白血病ウイルス(bovine leukemia virus)により引き起こされる地方病性牛白血病が近年増加傾向にあるとのことです。 そこで、ウイルスにより組み込まれたDNA(プロウイルスDNA)を測定できるか、モバイルPCR装置で調べてみました。

試料

と肉(牛)全血

前処理

凍結保管(-80℃)血液を遠心、PBS洗浄2回し試料とする

反応組成
μL備 考 (終濃度)
酵素;KAPA 3G Plant(2.5U/μL)0.61.6U/reaction
Buffer (x2)8x1
F-Primer (100μM) ※10.11000nM
R-Primer (100μM) ※10.11000nM
Probe (100μM) ※10.05600nM
試料1
PCR grade water 6.2

反応試料Total 16μL

プログラム

工程温度時間
初回変性95℃15sec
アニーリング・伸長60℃10sec45cycle
変性95℃3.5sec45cycle
結果

凍結保管の全血からダイレクトPCRにて牛白血病プロウイルスDNAが測定できる事が分かった。

※1 下記文献より改変

プライマー・プローブ

(株)日本遺伝子研究所製 

参考文献:Journal of Virological Methods 189 (2013) 258– 264 測定にご協力いただいた、宮崎県都城食肉衛生検査所様に深く感謝いたします。