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肉団子の材料はなに?

シリーズ:ちょっと測ってみました

肉団子の材料はなに?

肉団子はおいしいけど・・・何のお肉が使われているのか?気になる方もいるのではないでしょうか。
アレルギーをお持ちの方や正しく素材表示ができているか確認したいサービス業の人もいらっしゃると思います。
こんなこともモバイルPCR装置で簡単に調べられます。

試料

鶏団子0.1g、純水0.9mLの比で混ぜた懸濁液

前処理

5分程度煮沸後、煮汁を1mL採取し卓上遠心機で遠心5分
① 中心付近から1μL採取し試料とする
② ①を100倍希釈し1μL採取し試料とする

反応組成
μL 備考
酵素;KAPA 3G Plant(2.5U/μL) 0.8 2U/reaction
Buffer (×2) 8 x1
F-Primer:ウシ/ブタ/ニワトリ (各100μM)※1 0.06/0.06/0.1 400/400/600nM
R-Primer:ウシ/ブタ/ニワトリ (各100μM)※1 0.13/0.14/0.1 800/900/600nM
Probe:ウシ/ブタ/ニワトリ (各100μM)※1 各0.03 各200nM
MgCl2(25mM) 0.8 1.25mM
試料 1
PCR grade water 4.7

反応試料Total 16μL

プログラム
工程 温度 時間
初回変性 95℃ 15sec
アニーリング・伸長 60℃ 30sec ※2 50cycle
変性 95℃ 4sec

※2)開発初期の反応条件であり、その後63℃-15秒で増幅する事が確認できている。(技術資料参照)

結果

鶏の信号のみ増加したので材料は鶏であることが分かった。
この時のPCRの増幅曲線を下図に示す。

測定はウシ・ブタ・ニワトリのマルチプレックスで実施

※1 プライマー・プローブ配列
Tm
Cow-Primer F    5′-CCCGATTCTTCGCTTTCCAT-3′ (20mer) 66.8
Cow-Primer R    5’-CTACGTCTGAGGAAATTCCTGTTG-3′ (24mer) 65.4
Cow-probe    5’FAM-CATCATAGCAATTGCCATAGTCCAC-BHQ1-3’ (25mer) 72.9
Pig-Primer F    5′-CTTGCAAATCCTAACAGGCCTG-3′ (22mer) 66.2
Pig-Primer R   5′-CGTTTGCATGTAGATAGCGAATAAC-3′ (25mer) 65.0
Pig-probe     5’ROX-AACAGCTTTCTCATCAGTTACACACAT-BHQ2-3′ (27mer) 70.2
Chicken-Primer F    5′-TCTGGGCTTAACTCTCATACTCACC-3′ (25mer) 65.6
Chicken-Primer R    5′-GGTTACTAGTGGGTTTGCTGGG-3′ (22mer) 65.6
Chicken-probe    5’Cy5-CATTCCTAACACTAGCCCTATTCTCC-3’BHQ3 (26mer) 70.3

(株)日本遺伝子研究所製
Tm値計算は最近接塩基法による。ただしプローブは日本遺伝子研究所様の計算法による。
参考論文:Tanabe et al., A Real-Time Quantitative PCR Detection Method for Pork, Chicken, Beef, Mutton, Horseflesh in Foods.
Biosci. Biotechnol. Biochem., 2007, 71(12), 3131-3135